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猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位
版纳微型猪近交系 类无精症缺失基因(DAZL) 基因克隆 cDNA末端快速克隆(RACE) 组织表达 亚细胞定位
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2021/3/30
旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列，阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况。本研究以版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line，BMI）10月龄成年公猪为研究对象，屠宰收集组织样，利用RACE和RT-PCR技术获得DAZL基因cDNA全长序列；使用实时荧光定量PCR （qPCR）技术检测其mRNA多组织表达谱；在线分析蛋...
旨在克隆猪作用于RNA的腺苷脱氨酶2基因（ADAR2）全长cDNA序列，同时对该基因在猪不同组织中的表达规律进行探索。利用RACE （rapid-amplification of cDNA ends）对大白猪ADAR2基因mRNA全长序列进行克隆，并进行生物信息学分析；用荧光定量PCR方法检测35日龄大白猪心、肝、肺、肾、脾、脑、小肠、背最长肌和背部脂肪9种组织中ADAR2的表达水平。结果表明，猪...
山葡萄低温诱导酵母双杂三框cDNA文库构建和VaCIPK18互作蛋白筛选鉴定
山葡萄 低温胁迫 cDNA三框文库 VaCIPK18 VaPYL9 互作分析
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2021/1/12
类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL（calcineurin B-like protein）与其互作蛋白激酶CIPK（CBL-interacting protein kinase）组成的CBL-CIPK系统，在真核生物钙信号转导及各种胁迫应答途径中发挥重要作用。采用SMART与LD-PCR技术构建了山葡萄‘双丰’（Vitis amurensis Rupr. ‘Shuangfeng’）叶片组织低温胁迫下的均...
葡萄浆果内坏死病毒侵染的‘贝达'葡萄cDNA文库构建及其利用
葡萄浆果内坏死病毒；酵母双杂交, cDNA文库, 互作基因
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2021/4/28
葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus, GINV)侵染葡萄可引起葡萄叶片表现明显的褪绿斑驳症状,其致病的分子机制,特别是病毒与寄主互作蛋白的研究尚未见报道。本研究构建了GINV侵染的‘贝达'葡萄叶片的cDNA文库,并以GINV 外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵筛选文库中与其互作的寄主因子。本研究构建的cDNA文库库容量达1.6...
团头鲂AGRP和NPY基因cDNA克隆及其在饥饿与再摄食状态下的表达分析
团头鲂 刺鼠相关蛋白 神经肽Y 饥饿 基因表达
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2020/9/15
为研究刺鼠相关蛋白(AGRP)和神经肽Y(NPY)在团头鲂幼鱼应答饥饿与再摄食过程中所起的调控作用，本研究采用RACE PCR技术首次克隆了团头鲂AGRP和NPY基因全长cDNA序列，通过设置正常对照组(control，体质量3%持续投喂4周)、饥饿再投喂组(F/refeeding，饥饿2周+3%再投喂2周)、饥饿过量投喂组(F/excessive refeeding，饥饿2周+8%再投喂2周)和...
克隆获得桃蚜电压门控钠离子通道基因cDNA序列，明确钠离子通道的典型特征，为研究桃蚜抗性分子机理奠定基础。采用实验技术主要有RT-PCR和PCR，克隆桃蚜钠离子通道基因cDNA序列，利用相关软件对其序列进行生物信息学分析。克隆得到两段cDNA序列MpNav-1（NCBI登录号：MN124170）和MpNav-2（NCBI登录号：MN176136）。MpNav-1长度为2945 bp，包括2877 ...
盐胁迫下杜鹃差异表达基因的cDNA-SCoT分析
杜鹃 盐胁迫 cDNA-SCoT 差异表达基因
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2019/7/9
土壤盐渍是限制杜鹃属（Rhododendron L.）植物分布与园林应用的主要因素之一。为探究杜鹃在盐胁迫中的抗性分子机理，以2个杜鹃品种‘江南春早’（R.‘Jiangnan Chunzao’）和‘胭脂密’（R. obtusu‘Yanzhi Mi’）为材料，进行盐胁迫处理，然后采用cDNA-SCoT的方法进行差异表达基因的筛选。结果表明，40个引物能够扩增出90多条带，其长度在100 ~ 1 80...
为获取拟穴青蟹Cactus基因cDNA全长、分析基本生物学信息，并初步探索其在病原物刺激下的免疫反应，实验采用RACE技术获得了拟穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全长序列，其cDNA全长为2 035 bp，开放阅读框(ORF)1 311 bp，编码436个氨基酸，分子量为46.01 ku。对蛋白理化性质进行预测发现，SpCactus为亲水性蛋白，等电点pI为4.91。经预测，S...
U+3B8FNPR1同源基因全长cDNA的分离与表达分析
水杨酸 NPR1
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2019/4/8
NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一，主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法，筛选U+3B8F（Prunus salicina var. cordata）叶片全长均一化cDNA文库，分离U+3B8F叶片NPR1同源基因的全长cDNA；用不同浓度的水杨酸喷施一年生U+3B8F嫁接苗嫩叶，采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明，共...
日本沼虾C型凝集素结构域家族3的cDNA克隆、原核表达和定位分析
日本沼虾 C型凝集素结构域家族3 嗜水气单胞菌 基因表达
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2020/1/16
C型凝集素(C-type lectin)是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族，为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况，本研究应用cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因(MnLec3)的全长序列，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析Mn...
双峰驼CYP2J cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析
双峰驼 CYP2J 生物信息学分析 组织表达
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2019/1/16
旨在研究双峰驼CYP2J基因及其编码蛋白的结构和功能。本试验首先通过RACE和RT-PCR技术，扩增得到双峰驼CYP2J基因cDNA全长。然后利用生物信息学方法，对该基因编码的蛋白特征进行分析，并使用MEGA 6软件构建双峰驼CYP2J蛋白与相关物种CYP2J蛋白的进化树。最后利用实时荧光定量PCR测定CYP2J基因在双峰驼各组织的表达量差异。结果表明，双峰驼CYP2J基因cDNA全长为1 770...
利用膜蛋白酵母双杂交系统构建人尿道上皮细胞cDNA文库
膜蛋白酵母双杂交 人尿道上皮细胞 cDNA文库
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2018/10/16
利用基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交技术,构建人永生尿道上皮细胞(SV-HUC-1)cDNA文库。Trizol法提取人尿道上皮细胞总RNA,并分离纯化其mRNA；以mRNA为模板,合成cDNA第一链、第二链；通过T4 DNA聚合酶将DNA链两端加上5′接头；并将其大于1 kbp的片段与膜蛋白酵母双杂交载体pPR3-N连接,经电转化大肠杆菌感受态细胞,以构建基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交c...
柑橘衰退病晚期抑制差减cDNA文库的构建及初步分析
杂柑 柑橘衰退病 抑制差减杂交 应答基因
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2018/6/1
为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理，利用经典的抑制差减杂交技术，以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的cDNA为测试方，以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的cDNA为驱动方进行差减杂交，构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减cDNA文库。随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序，获得了192条有效序列。将这些EST序列聚类拼接后，共获得77条非重复序列。对这些EST进行GO和KEGG分...
表达序列标签（EST）广泛应用于基因功能研究和分子标记开发。以普通烟草两个二倍体祖先种绒毛状烟草（Nicotiana tomentosiformis，TT）和林烟草（Nicotiana sylvestris，SS）多个组织为试验材料，使用CloneMiner cDNA文库构建方法构建了均一化全长cDNA文库，测序并进行序列拼接、功能注释、进化分析和标记开发。绒毛状烟草和林烟草均一化全长cDNA文库...