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PKCε与Lck在细胞内直接相互作用的荧光共振能量转移证据
缺血预适应 PKC Lck 蛋白质相互作用 荧光共振能量转移
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2007/12/19
摘要 蛋白激酶Cε亚型 (PKCε)和蛋白酪氨酸激酸Lck均在心肌缺血预适应的信号转导中起着十分重要的作用 .构建PKCε和Lck与绿色荧光蛋白的融合蛋白的真核细胞表达载体 .将其共转染H2 93细胞进行表达 .用荧光显微镜观察到荧光共振能量转移现象 ,从而获得了PKCε和Lck在细胞内发生直接相互作用的证据
人神经生长抑制因子β结构域的高效表达及性质研究
神经生长抑制因子 β结构域 表达 性质
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2007/12/19
摘要 神经生长抑制因子（ Ｇ Ｉ Ｆ）是一种特异存在于哺乳动物脑中的金属硫蛋白（ｍ ｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ， Ｍ Ｔ）类似物，又称 Ｍ ＴⅢ．它与 Ｍ Ｔ 有相同的结合 Ｚｎ（Ⅱ）， Ｃｄ（Ⅱ）， Ｃｕ（Ⅰ）等金属的能力，但与 Ｍ Ｔ 不同的是它能够抑制神经细胞的生长，并发现在患 Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ Ａ Ｄ 症）病人的大脑中 Ｇ Ｉ Ｆ蛋白量和ｍ Ｒ ...
iNOS在不同种属血管细胞中诱导表达差异的比较研究
ｉＮＯＳ基因 表达调节 种属 血管细胞
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2007/12/19
摘要 为了探讨不同种属血管细胞中ｉＮＯＳ基因诱导表达的差异及其分子机制，采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ印迹、电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）和细胞转染实验对ｉＮＯＳ基因在人、牛、大鼠血管内皮细胞（ＥＣ）和兔、大鼠平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中的诱导表达和转录调控机制进行了研究．结果显示，ＩＬ－１β可诱导人、大鼠的ＥＣ和大鼠的ＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ，但对兔ＶＳＭＣ和牛ＥＣ无诱导作用．在ＩＬ－１β＋ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ作...
HeLa细胞中Skp2的表达调控p21WAFCIP1稳定性
Skp2 p21WAFCIP1蛋白稳定性 泛素蛋白酶体通路
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2007/12/18
摘要 泛素 蛋白酶体抑制剂MG 132处理的HeLa和SaoS 2细胞中 ,低表达的p2 1WAF CIP1受泛素 蛋白酶体通路调控 .为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基 Skp2和低表达的p2 1WAF CIP1之间的关系 ,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后 ,p2 1表达水平明显升高 .同时 ,相对于转染空载体和Skp2ΔF(Skp2的F box缺失突变体 )的真...
蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析
神经毒素类似物 基因融合表达 蛋白印迹杂交
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2007/12/18
摘要 选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血...
白细胞介素2亲和性配体的筛选
肽库 白细胞介素2受体α链 配体
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2007/12/18
摘要 白细胞介素 2 ( IL- 2 )及其受体拮抗剂的研究对免疫抑制药物的研制具有重要作用 .抗白细胞介素 2受体α链中和性单克隆抗体 5 G1(抗 Tac型抗体 )能够特异性地阻断 IL- 2与其受体的结合 .因此 ,5 G1可作为目标分子被用来在噬菌体展示肽库中筛选白细胞介素 2的亲和性配体 .经过 4轮亲和性筛选以及 5 G1亲和活性的测定 ,6个具有明显 5 G1亲和活性的噬菌体克隆被发...
GDNF重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究
胶质细胞源性神经营养因子 重组腺病毒 基因转移 基因治疗 帕金森氏病
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2007/12/18
摘要 利用体内同源重组原理，构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ，其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后，用形态学方法、病毒ＤＮＡ酶切分析、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法进行鉴定正确．经测定病毒滴度达到１０１０ｐｆｕ／ｍｌ．用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的２９３细胞及其培养基上清中均检测到大...
神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨
神经酰胺 耐药性 细胞凋亡
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2007/12/18
摘要 以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异，以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力，并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ，观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ；外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５...
脱血红素细胞色素c自发折叠的进一步验证
脱血红素细胞色素ｃ 蛋白质折叠 胰蛋白酶水解 敏感性
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2007/12/18
摘要 用胰蛋白酶水解结合聚丙烯酰胺凝胶电泳以及纳秒内源荧光衰减谱分析对鸡心脱血红素细胞色素ｃ在透析复性过程的自发折叠现象作进一步确定。结果显示随着透析复性时间的增加，鸡心脱血红素细胞色素ｃ对胰蛋白酶的水解敏感性逐渐下降，内源荧光寿命值增大，与此对应的马心脱血红素细胞色素ｃ没有发生变化。
摘要 靛玉红是一种新型抗癌药物,治疗慢性粒细胞白血病(CML)有较好的疗效。本文通过体内及体外实验采用靛玉红—脂质体为剂型,观察药物对CML细胞的作用。据荧光偏振度的测定结果表明,此药物分子能降低大白鼠白细胞膜流动性。还测定服药3天的患者外周白细胞中DNA聚合酶Ⅰ的活性,比治疗前降低74±1％。为靛玉红抑制CML细胞DNA合成的机理提供依据。此外,还使用载有靛玉红的脂质体进行体外实验,表明靛玉红可...
PIC-BE诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的研究
细胞凋亡 多药耐药性 β榄香烯吗素 人红白血病细胞
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2007/12/18
摘要 β榄香烯吗素（ＰＩＣ－ＢＥ）是抗癌新药β榄香烯的水溶性衍生物．采用人红白血病的多药耐药性（ＭＤＲ）细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ作为实验模型，观察ＰＩＣ－ＢＥ对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞的生长抑制和凋亡诱导作用，并进而研究其对该细胞ＭＤＲ的可能影响．结果显示：（１）Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对ＡＤＭ具有明显的抗性，与Ｋ５６２细胞相比，抗性倍数约为４０倍，而两者对ＰＩＣ－ＢＥ的ＩＣ５０接近，无显著差异；（２）ＰＩ...
神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化
ＧＤＮＦ编码顺序 ＰＣＲ方法 ＧＤＮＦ的表达 ｒｈＧＤＮＦ的纯化
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2007/12/18
摘要 根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的...
氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨
过氧化氢 细胞凋亡 基因表达
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2007/12/18
摘要 以过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱导人慢性髓细胞白血病（Ｋ５６２）细胞为凋亡模型，采用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）和激光共聚焦扫描显微镜（ｌａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＬＣＳＭ）研究细胞凋亡，形态观察出现核固缩，核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征．ＤＮＡ电泳图谱出现“Ｌａｄｄｅｒ”．ＦＣＭ检测在Ｇ０／Ｇ１峰前出现一低ＤＮＡ含量的凋亡峰．ＬＣＳＭ显示凋亡...
一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究
东亚钳蝎（ＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉｉＫａｒｓｃｈ） 神经毒素 结晶 晶体学参数
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2007/12/17
摘要 经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析，从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８．等电聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分，其ｐＩ为９．１，Ｍｒ为７１００．毒性测试结果表明，该组分对小白鼠有较强的毒性，对昆虫也有一定的毒性，已获得该毒素的两种晶型的大单晶，并测定其空间群为Ｐ２＿１２＿１２＿１，晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７，ｂ＝２６．６，ｃ＝...
白细胞介素-2的PEG化
白细胞介素－２ ＰＥＧ化 化学修饰
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2007/12/17
摘要 用自制的氨基ＰＥＧ化试剂ｒＩＬ－２进行化学修饰，研究了试剂浓度，溶液ｐＨ，反应时间等与ＰＥｃａ－ｒＩＬ－２产率及ＩＬ－２活性保持之间的关系，建立了一套获得稳定修饰度的ＰＥＧ－ｒＩＬ－２的方法。研究发现，反应时间跟修饰度关系不大；溶液ｐＨ对修饰度有一定的影响，中性ｐＨ以上反应都可进行；而试剂浓度直接决定修饰度的高低，过量越多，修饰度越高，而生物活性保留也越低；但低度修饰，对活性几乎没有影响，可...