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TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR）是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和去除活性氧（Reactive oxygen species,ROS）并降低由活性氧诱发的细胞凋亡水平。【目的】 构建鸡源TIGAR基因的真核表达质粒,并检测TIGAR基因在DF1细胞中的抗凋亡作用,为建立稳定表达鸡...
甘草中新NADPH细胞色素P450还原酶基因的克隆与相关生物信息学分析
甘草 NADPH细胞色素P450还原酶 基因克隆 生物信息学分析 PCR
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2020/1/13
目的 从甘草Glycyrrhiza uralensis中克隆1个新的NADPH细胞色素P450还原酶基因（GuCPR，登录号：MH401048）并进行生物信息学分析。方法 提取甘草根部总RNA后逆转录为cDNA，通过转录组数据库筛选得到GuCPR基因全长，利用NCBI ORF finder得到其开放阅读框并翻译得氨基酸序列，设计引物进行PCR扩增，构建克隆重组质粒。利用生物信息分析预测蛋白性质、结...
目的 克隆膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶（PAL）基因家族成员，分析它们在不同组织中的表达模式与毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量变化，为揭示膜荚黄芪毛蕊异黄酮葡萄糖苷积累的分子机制提供理论依据。方法 以膜荚黄芪总RNA为模板，采用同源克隆法和RACE技术克隆PAL基因并进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR技术测定PAL基因在根、茎、叶中的表达量；采用HPLC法测定了根、茎、叶中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。
剪掉“坏基因”，“上帝的手术刀”难免失手（图）
单基因遗传疾病 流式细胞分选技术 受精卵分裂 检测脱靶技术
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2022/2/28
或许你正不幸被某种单基因遗传疾病折磨，比如血友病、白化病等。有一天，医生告诉你，可以用基因编辑技术“剪去”那个令你承受病痛的“坏基因”，是不是会心存感谢？
目的 克隆山茱萸转录因子CobHLH7的cDNA序列。方法 以转录组数据中unigene c15204_g1序列为参考，在其开放阅读框两端设计特异引物，提取山茱萸果实总RNA，并反转录成cDNA，以此为模板，经RT-PCR扩增、连接pMD19-T克隆载体并测序，获得CobHLH7的cDNA序列。通过Protparatam、ProtScale、SOPMA等软件，对其进行生物信息学分析。结果 CobH...
目的 皂苷是滇重楼的主要药效成分，获取滇重楼皂苷合成途径中关键基因（MVD）的cDNA全长序列，并对该序列进行生物信息学及表达量分析。方法 通过同源克隆法得到滇重楼MVD cDNA的保守片段，利用RACE技术获得MVD cDNA全长序列，命名为PpMVD，并进行生物信息学分析，通过实时荧光定量（RT-PCR）法检测PpMVD在滇重楼不同组织中的表达情况。结果 PpMVD基因cDNA全长1 583 ...
探讨Bcl-2基因-938位点单核苷酸多态性与食管癌、贲门癌的关联。方法 采用病例对照的研究方法，于2007—2010年在河北医科大学第四医院门诊收集食管癌、贲门癌患者各145、169例为病例组，同期选取195例来自该地就诊的非肿瘤患者为对照组。采用问卷调查收集研究对象信息，采集食管、贲门病变组织，提取基因组DNA，并检测Bcl-2基因-938位点基因型；采用多因素logistic回归模型，分析...
CRISPR-Cas9敲除Notch1对CNE2细胞增殖及辐射敏感性的影响
Notch1基因 CRISPR-Cas9 鼻咽癌 辐射敏感性
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2020/1/2
Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用，既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失。本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系，并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中N...
目的 克隆刺五加香叶基焦磷酸合成酶（geranyl pyrophosphate synthase，GPS）基因的cDNA序列并分析基因序列特征、不同器官中基因表达水平及其与皂苷含量的相关性。方法 提取刺五加的RNA，逆转录为cDNA。根据转录组测序结果中编码GPS的unigene（c37362.graph_c0），设计特异性引物，经过PCR扩增GPS基因的cDNA全长。利用实时荧光定量PCR（qR...
霍山石斛β-1,4-木糖基转移酶（IRX9）基因克隆及生物信息学分析
霍山石斛 β-1, 4-木糖基转移酶 基因克隆 生物信息学分析 RT-PCR
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2020/1/9
目的 克隆霍山石斛β-1，4-木糖基转移酶（IRX9）基因，并进行生物信息学、密码子偏性分析。方法 根据霍山石斛转录组数据获得的IRX9基因序列设计特异性引物，通过RT-PCR技术得到IRX9基因cDNA的全长序列，并进行生物信息学分析。结果 霍山石斛IRX9基因全长1 553 bp，包含一个长度为1 047 bp的开放阅读框，编码348个氨基酸，理论相对分子质量为39 350，等电点为7.26，...
探讨良性脑膜瘤中炎症因子IL-1β在NF2甲基化中的作用及调控机制。［方法］ 利用2个脑膜瘤患者手术后的标本做原代细胞培养，不同浓度IL-1β（0，0.2， 0.4，0.8，1.0，10ng/ml）处理细胞，利用RT-PCR和Western blot检测NF2、merlin和DNMTs的表达，利用甲基化特异性PCR检测NF2启动子甲基化水平。通过共同添加IL-1β和DNMT抑制剂或siRNA，观察...
红花ERF1转录因子的克隆及植物表达载体的构建
红花 AP2/ERF转录因子 黄酮合成 基因克隆 植物表达载体
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2020/1/7
目的 克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列，并构建植物表达载体。方法 在红花转录组测序基础上，利用RT-PCR方法克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列（CtERF1）并进行生物信息学分析，利用ClustalW 1.83软件构建系统进化树，在CtERF1基因序列两端引入Spe I和XbaI酶切位点，构建含有35 S启动子的植物超表达载体pBASTA-CtERF1。结果 CtE...
基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用
猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白 原核表达 ELISA检测
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2019/3/9
为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型（PCV3）抗体检测方法，对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端（羧基端），而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3 ORF2序列为靶基因，设计引物。以PCV3阳性病料为模板，PCR扩增截短的ORF2基因，并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒，并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞，获得重组菌...
猪主要经济性状的基因组选择研究
猪 基因组选择 遗传力 准确性
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2019/3/9
旨在系统比较GBLUP、SSGBLUP、BayesA、BayesB、BayesC、BayesLASSO、BSLMM和BayesR等8种方法对猪重要经济性状基因组选择的准确性。本研究以本实验室收集的2 585头大白猪达100 kg日龄、达100 kg背膘厚和母猪乳头数3个性状为分析对象，结合猪50K基因芯片分型数据，以加性模型为基础，利用5倍交叉验证比较8种方法的基因组选择准确性。研究发现，基因组选...