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半滑舌鳎脑芳香化酶基因cDNA克隆及表达分析
半滑舌鳎 芳香化酶 cDNA克隆 表达
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2009/6/25
为研究脑型芳香化酶（P450aromB）在半滑舌鳎性别分化中的作用，采用同源克隆策略,从半滑舌鳎脑分离了2184 bp长的脑型芳香化酶的全长cDNA，该基因编码498个氨基酸。氨基酸序列和系统发育分析表明，P450aromB属于脑型P450arom，P450aromB的氨基酸序列与其他鱼类脑型Ｐ450arom的同源性较高（48.3%—66.1%），与性腺型Ｐ450arom的同源性较低(34.2%—...
采用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建了黑斑蛙(Rana nigromaculata)精巢组织全长cDNA文库。一步法提取成体蛙精巢组织总RNA，用Powerscript TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA；再用LD-PCR合成双链cDNA；经过SfiⅠ酶切和Chroma spin-400柱分离后，500 bp以上的...
黑鲷DMRT1基因cDNA的克隆、组织表达谱及在性别逆转前后性腺中的表达
黑鲷 DMRT1基因 表达 精巢
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2009/6/23
利用RT-PCR和3′-RACE的方法从黑鲷精巢中克隆了DMRT1基因cDNA的部分序列。组织特异性表达分析表明DMRT1基因只在精巢中表达。半定量RT-PCR检测显示DMRT1基因在性别逆转前、性别逆转期和性别逆转后的精巢中的表达量无显著差异。在鱼类成体的精巢中，DMRT1的表达量可能不会因精巢结构或生理状态的改变而发生改变，而始终维持一定量的表达。
恒河猴大脑前额叶cDNA文库的构建
恒河猴 大脑前额叶 cDNA文库 大脑表达基因
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2009/6/23
为筛选出与认知、记忆相关的脑部表达基因及基因家族，利用TRIzol试剂从恒河猴大脑前额叶组织抽提总RNA，再用纯化试剂盒从总RNA中成功纯化出mRNA。按照Stratagene公司的cDNA Synthesis Kit(200401)、ZAP-cDNA Synthesis Kit(200400)和ZAP-cDNA GigapackⅢ Gold Cloning Kit(200450)三个试剂盒的操作...
采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术，构建了家蝇(Musca domestica)的cDNA质粒文库。按TRIzol Reagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA，以此为模板，通过PowerScript[TM]反转录酶反转录合成第一链cDNA；再以第一链cDNA产物为模板，用LD-PCR合成cDNA双链。该cDNA...
金鱼Prox1基因cDNA的克隆及其在眼睛发育中的表达分析
Homeobox结构域 Prospero结构域 金鱼（Carassius auratus） 眼睛发育
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2009/6/23
脊椎动物的Prox1基因，与果蝇的转录因子prospero同源。为了探讨Prox1基因在金鱼眼睛发生过程中的表达图式，我们从金鱼眼睛SMART库中克隆了Prox1 cDNA。它全长共2 851bp，编码739个氨基酸。组织分布研究表明，Prox1主要分布于眼、脑、心、肝、脾和肾中。整体原位杂交显示，Prox1 mRNA首先是在晶体期的晶体原基中有转录，心跳期则在未成熟晶体的细胞中和视网膜的幼芽区可...
从淡水食毒藻鱼类鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)肝脏，通过简并引物克隆解偶联蛋白2(uncoupling protein 2，UCP2) cDNA核心序列，应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增该序列的5′末端和3′末端序列，最后通过序列拼接获得鲢鱼肝脏UCP2 cDNA全序列。序列分析结果表明，鲢鱼肝脏UCP2 cDNA全长1 452 bp，其中5′-UTR长3...
利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
非洲爪蟾 酵母双杂交 随机引物 定向cDNA文库
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2009/6/23
描述了一种新的构建cDNA文库的方法，其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d（AC），在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d（GTCG）。在cDNA双链3′-端，连接子连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d（GTCGAC），而在5′-端几乎不会形成SalI位点。在SalI酶切后利用形成的3′-粘性末端与5′-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒...
两个蛇毒基因克隆及cDNA序列多态性再分析
α-银环蛇毒素 多态性 RNA编辑 突变
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2009/6/23
α-银环蛇毒素（α-bungarotoxin）是一种突触后神经毒素，广泛存在于眼镜蛇科蛇类的毒腺中，对于该基因cDNA多态性是否真实一直存有争议。本研究从银环蛇基因组DNA中克隆到α-银环蛇毒素基因序列，并对其中5个克隆进行测序和序列比对分析。作为参照，从同一次反转录得到的cDNA混合物中，克隆了蛇毒神经生长因子cDNA，并对其进行测序、比对和突变情况分析。综合各研究组报道的α-银环蛇毒素cDNA...
日本血吸虫真核翻译起始因子5基因的cDNA克隆和免疫保护功能分析(英文)
日本血吸虫 真核翻译起始因子5(eIF5) 表达 疫苗
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2009/6/23
利用抑制削减杂交法筛选日本血吸虫雌雄虫差异基因，从中获得真核翻译起始因子5基因(eIF5)的表达序列标。对该序列进行生物信息学分析：对其5′端进行电子延伸，获得含完整开放阅读框的cDNA序列(AY686501)。将其亚克隆到表达载体pET-28c，进行重组表达。免疫保护效果实验表明，重组表达蛋白具有显著抑制血吸虫卵在寄主肝脏中的沉积效果。
内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤cDNA文库的构建及KAP6-2 cDNA的克隆
内蒙古绒山羊 KAP6-2 全长cDNA
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2009/6/22
用SMART技术构建了绒山羊(Capra hircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。Trizol Reagent(GIBCO/BRL)分离RNA后，用Oligotex(QIAGEN)提取mRNA；以锚定引物反转录合成cDNA第一链作为模板，以2个锚定引物，用长链PCR扩增全长cDNA双链。CHROMA SPIN-400去除小片段后用SfiⅠ酶切，连接到SfiⅠ消化的pBluescript...
史氏鲟Sox9基因cDNA的克隆及在早期发育过程不同组织中的表达
史氏鲟 Sox9基因 基因表达
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2009/6/22
利用RT-PCR和RACE的方法从史氏鲟(Acipenser schrenckii)中克隆了Sox9基因cDNA的部分序列(1 140 bp)。组织特异性表达分析表明Sox9基因在1[+]-3[+]年龄史氏鲟的大脑、心脏、肝脏、眼睛、胰脏、肾脏、精巢和卵巢等8种组织中均有表达，只是表达量随发育阶段和组织的不同而稍有差异。刚孵出1日龄的史氏鲟鱼苗中Sox9微量表达，而孵出15日龄的鱼苗中表达量上升。...
兔骨形态发生蛋白15 cDNA部分序列的克隆及其在卵母细胞中的表达(英文）
兔 骨形态发生蛋白15 卵母细胞 克隆 荧光定量RT-PCR
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2009/6/22
采用RT-PCR法从新西兰大白兔卵巢中克隆出BMP15基因部分cDNA片段，经blast分析后，发现其与猪、牛、绵羊、山羊、人和小鼠的同源性达到了83%—90%。同时，利用实时荧光定量RT-PCR方法检测了BMP15 mRNA在卵母细胞体外成熟培养过程中（IVM）的表达变化情况，结果表明：在兔卵母细胞体外成熟过程中，该基因在未成熟卵母细胞中表达水平较低，在培养16 h其表达丰度达到峰值，并与卵丘扩...
圆斑蝰蛇毒七个C-型凝集素样蛋白亚基的cDNA克隆与序列分析(英文)
圆斑蝰蛇 蛇毒C-型真凝集素 蛇毒C-型凝集素样蛋白 cDNA 序列分析
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2009/6/19
按照Promega公司的mRNA提取试剂盒操作手册，从圆斑蝰蛇(Daboia russellii siamensis)的毒腺中提取mRNA；利用RT-PCR的方法进行体外扩增，获得C-型凝集素蛋白的基因，克隆到pMD18-T载体中。随机挑选14个阳性克隆进行核酸测序，获得7个编码不同蛇毒C-型凝集素样蛋白亚基的cDNA，分别命名为DRS-L1、DRS-L2、DRS-L3、DRS-L4、DRS-L5...
从一种来自中国日行性萤火虫（云南窗萤）发光器官mRNA中克隆、测序并表达了有功能的荧光素酶。云南窗萤荧光素酶的cDNA序列有1 647个碱基，编码548个氨基酸残基。从推测得到的氨基酸序列的比对分析得出：云南窗萤的荧光素酶与来自Lampyris noctiluca, L. turkestanicus和Nyctophila cf. caucasica三种萤火虫的荧光素酶有97.8%的序列一致性。从推...